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鲤鱼重组IL–17N的原核表达条件优化及蛋白纯化

2020-06-24分类号:S917.4

【作者】张磊  唐永凯  李红霞  徐逾鑫  李迎宾  俞菊华  
【部门】南京农业大学无锡渔业学院  中国水产科学研究院淡水渔业研究中心  
【摘要】为获得可溶的鲤鱼IL–17N重组蛋白,构建原核重组表达质粒GST–17N、SUMO–GST–17N和MBP–17N,确定IL–17N的最适促溶标签,并优化其诱导表达条件(诱导剂异丙基–β–D–硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度、诱导时间和诱导温度)。结果:成功构建了鲤鱼IL–17N原核重组表达载体GST–17N、SUMO–GST–17N和MBP–17N;融合标签MBP、SUMO–GST和GST的促溶效果依次降低,SUMO–GST–17N、MBP–17N上清蛋白占总蛋白比例分别为47.4%、87.0%;MBP–17N的最佳表达条件为0.5 mmol/L IPTG,25℃诱导8~12 h;经过镍柱纯化,获得可溶MBP–17N蛋白,每克总菌约获得0.09 mg MBP–17N蛋白。
【关键词】鲤鱼  白细胞介素17N  原核表达  重组蛋白  融合标签  蛋白纯化
【基金】中央级基本科研业务费(2018HY–ZD02)
【所属期刊栏目】湖南农业大学学报(自然科学版)
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