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超速离心-沉降速率法测定蛋白质分子量的实验条件

2020-06-17分类号:O629.73

【作者】雷敏  刘斌  阮梅林  罗云  
【部门】华中科技大学生命科学研究共享平台  
【摘要】分子量是蛋白质的重要特征参数,准确测定蛋白质分子量对研究蛋白质结构与功能具有重要意义。该文以牛血清蛋白(BSA)和人血清免疫球蛋白(IgG)为研究对象,采用分析超速离心-沉降速率法(AUC-SV)测定2种蛋白的分子量,并系统研究了样品初始浓度、离心转速、离心时间、离心温度、样品上样体积和缓冲液体系等实验条件对测定结果的影响。结果表明:离心转速为20 000~40 000 r/min时,影响不明显,样品初始浓度、离心时间、离心温度、缓冲液体系的适宜范围较宽,样品上样体积对测定结果的影响显著。在优化的实验条件下,测得未知蛋白的分子量为39.9 kDa,与质谱法测定结果(40.0 kDa)一致。该方法具有适宜条件范围宽、非破坏性、无需标准品和普适性高等优点,适用于未知蛋白分子量的测定。此外,相关研究结论还可供AUC-SV初学者学习借鉴。
【关键词】分析超速离心  沉降速率  蛋白质分子量
【基金】国家自然科学基金资助项目(51773070);; 华中科技大学实验技术改造项目(2019)
【所属期刊栏目】实验技术与管理
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