基于toxR基因的轮虫弧菌荧光定量微流控快速检测技术的建立
2020-05-21分类号:S941.42
【部门】上海海洋大学水产与生命学院 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食品产出过程功能实验室
【摘要】本实验以轮虫弧菌的单拷贝基因toxR基因的高保守区域为目的片段,设计特异性引物,构建重组质粒标准品,建立针对该菌的荧光定量PCR检测方法。以此为基础,选用UF-150 Genechecker微流控荧光定量PCR仪,通过优化反应体系和反应条件,建立了轮虫弧菌的微流控荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性扩增toxR基因目的片段,对轮虫弧菌纯培养物检测下限为1.34×10~(0) 拷贝/μL。在人工感染样品中的应用结果显示,对鱼体组织中轮虫弧菌的检测下限为1.34×10~(3) CFU/g,检测结果可以目视判读,检测时间缩短至42 min以内。该检测方法具有特异性强、敏感度高、场地要求低等突出优势,适于开发水产病原实用性的现场快速检测技术。
【关键词】轮虫弧菌 toxR 实时荧光定量PCR 微流控快速检测
【基金】国家重点研发计划课题(2019YFD0900104);; 山东省重大科技创新工程项目(2018YFJH0730);
【所属期刊栏目】水产学报
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