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DCN在猪卵巢颗粒细胞凋亡中的作用

2020-05-09分类号:S828

【作者】曹秋瑜  姚望  杜星  潘增祥  李齐发  
【部门】南京农业大学动物科技学院  
【摘要】[目的] 了解猪DCN基因的序列特征、蛋白结构和性质,探讨其在猪卵巢颗粒细胞凋亡过程中的作用。[方法] 利用PCR扩增和测序技术获得猪DCN基因编码区序列,并进行生物信息学分析;利用双酶切法构建猪DCN基因的过表达载体,瞬时转染至体外培养的猪卵巢颗粒细胞中,利用qRT-PCR和western blot技术检测其mRNA和蛋白水平;利用流式细胞术检测猪卵巢颗粒细胞凋亡率。[结果] 猪DCN基因编码区核苷酸序列与哺乳动物其它物种在进化过程中比较保守。猪DCN基因编码蛋白含有360个氨基酸,有糖胺聚糖附着位点(GAS)、亮氨酸重复序列N端结构域(LRRNT)和12个富亮氨酸重复序列(LRR)等重要的保守结构域。猪DCN蛋白三级结构呈马蹄铁形状。成功构建了猪DCN基因真核生物表达载体,转染体外培养的猪卵巢颗粒细胞后发现,DCN过表达显著促进了猪卵巢颗粒细胞凋亡率,显著上调了促凋亡基因BAX与凋亡标志蛋白cleaved-Caspase3的表达水平,而BCL-2/BAX比值则显著降低。[结论] DCN基因在哺乳动物的进化过程中比较保守,是猪卵巢颗粒细胞的促凋亡因子。
【关键词】猪  DCN基因  卵巢颗粒细胞  细胞凋亡
【基金】国家自然科学基金(31902130)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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