刚地弓形虫热休克蛋白21体外条件下对小鼠巨噬细胞功能的影响
2020-03-24分类号:S852.72
【部门】南京农业大学动物医学院
【摘要】[目的]本试验旨在探究刚地弓形虫热休克蛋白21(TgHSP21)在体外对小鼠巨噬细胞系(Ana-1)功能的调节作用。[方法]构建重组表达载体pET-32a (+)/TgHSP21,获得重组蛋白TgHSP21(rTgHSP21)。用免疫荧光抗体试验(IFA)验证rTgHSP21在体外与Ana-1细胞的结合情况。Ana-1细胞分别用不同浓度的rTgHSP21处理后,采取细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖情况,应用Transwell细胞小室检测细胞趋化情况,应用流式细胞术检测Ana-1细胞凋亡和吞噬能力。Ana-1细胞NO(一氧化氮)和肿瘤坏死因子α (TNF-α) 、白介素12(IL-12)、白介素6(IL-6)、白介素1β (IL-1β) 的分泌量分别用总NO试剂盒和细胞因子酶联免疫吸附剂测定(ELISA)试剂盒来检测。[结果]成功获得纯化的rTgHSP21,具有与Ana-1细胞结合的能力。rTgHSP21在浓度为5和10 μg·mL~(-1)时显著促进Ana-1细胞的增殖,各个浓度的rTgHSP21均显著促进细胞凋亡和吞噬能力。80 μg·mL~(-1)的 rTgHSP21明显促进Ana-1细胞NO的分泌。在不同浓度下,细胞因子IL-6和TNF-α的表达量均明显上升。而在浓度为10、20、40和80 μg·mL~(-1)时细胞因子IL-12的分泌被抑制。此外,rTgHSP21显著抑制了Ana-1细胞的迁移能力。[结论]TgHSP21能够与Ana-1细胞结合并在体外条件下影响Ana-1细胞的凋亡比例、趋化性、增殖和吞噬能力,对Ana-1细胞的细胞因子IL-6、TNF-α、IL-12和NO的分泌也有影响。
【关键词】弓形虫 热休克蛋白21 小鼠巨噬细胞系 免疫功能
【基金】家畜疫病病原生物学国家重点实验室(中国农业科学院兰州兽医研究所)开放课题资助;; 江苏省高等学校重点学术项目(PAPD)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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