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脱氧核酶-等温级联放大传感体系高灵敏检测水样中铅离子

2020-03-20分类号:X832;O657.3

【作者】陆云飞  贾敏  吴继魁  
【部门】上海海洋大学食品学院  上海水产品加工及贮藏工程技术中心  农业农村部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室  
【摘要】结合等温直链替代反应(SDA)和指数扩增(EXPAR)设计了一种非标记、高灵敏的Pb~(2+)荧光生物传感体系。在 Pb~(2+)存在情况下,底物链被活化的GR-5 DNAzyme快速切割释放引物1。引物1与模板1杂交,并被DNA聚合酶(BSM)延伸形成带限制性内切酶(Nt.BbvCI)的识别序列的双链核苷酸。BSM从Nt.BbvCI切割产生的切口再次延伸形成双链核苷酸,并释放信号G4-DNA片段。G4-DNA片段同时又可以作为模板2的引物,启动指数放大过程,从而释放更多的信号G4-DNA片段。最后,扩增产物G4-DNA与原卟啉锌(ZnPPIX)相互结合从而产生强烈的荧光信号。我们详细优化了多种因素对检测体系的影响,在最优实验条件下,此方法对Pb~(2+)的线性检测范围为 0.1~50 nmol/L,检出限为0.03 nmol/L(S/N=3),回归方程为 y=288.7x+744.7(y为荧光强度,x为Pb~(2+)浓度)。干扰实验表明,该传感器对Pb~(2+)具有良好的特异性和选择性。该传感体系成功应用于环境水体中 Pb~(2+)含量检测,加标回收率为 94.0%~103.0%。本方法操作简单、选择性好、灵敏度高、有较强的抗干扰性能,可用于环境水样中Pb~(2+)的高灵敏检测。
【关键词】Pb~(2+)  荧光传感器  等温信号放大  G-四联体  原卟啉锌  GR-5 DNAzyme
【基金】国家自然科学基金(31972772);; 上海自然科学基金(11ZR415400)
【所属期刊栏目】上海海洋大学学报
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