南极磷虾羧肽酶的分离纯化及酶学性质
2020-03-05分类号:S917.4
【部门】上海海洋大学食品学院
【摘要】南极磷虾生活在在极寒环境,其体内特殊的蛋白酶系统是其维持正常新陈代谢的关键因素。羧肽酶为南极磷虾蛋白酶系统中一类主要且关键的蛋白酶,酶学性质研究对其后续基础研究开展及商业利用都具有指导意义。本研究以南极磷虾为原料,采用缓冲液提取、硫酸铵分级盐析,DEAE-琼脂糖凝胶FF阴离子层析和Sephadex G-100凝胶层析,从南极磷虾匀浆液中分离纯化出一种羧肽酶,SDS-PAGE结果显示其分子量为30ku。酶学性质研究结果显示:该酶最适温度为30℃;最适pH为8.0。热稳定性较差,即使在4℃下保温超过2h酶活性会急剧下降。金属离子Ni~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)具有激活作用,且激活作用依次增强;而Ca~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)起抑制作用,Cu~(2+)抑制效果最明显。对巯基有修饰作用的抑制剂DTT、β-巯基乙醇对其有抑制作用,推测该酶活性中心存在二硫键;金属蛋白酶抑制剂EDTA、1,10-菲罗啉对该酶活性有明显的抑制作用,说明了其具有金属蛋白酶特性;而丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对该酶抑制作用并不强烈。以脲酰-L-苯丙氨酸为底物溶液,测得该酶Km为0.0059mg/mL、Vmax为4.9091U/min。
【关键词】南极磷虾 羧肽酶 分离纯化 酶学性质
【基金】国家自然科学基金面上项目(31471685);; 南极磷虾胰蛋白酶的基因克隆研究(A2-2006-00-200343)
【所属期刊栏目】上海海洋大学学报
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