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镰孢菌属实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

2019-12-28分类号:S432.4

【作者】陈利达  袁军海  李磊  石延霞  柴阿丽  谢学文  李宝聚  
【部门】中国农业科学院蔬菜花卉研究所  河北北方学院  
【摘要】为了建立一种快速检测镰孢菌属的方法。根据Fusarium翻译延伸因子(TEF-1α)基因序列,设计并筛选其特异性引物F8-1/F8-2,能从靶标基因组DNA中特异性扩增出大小为187 bp的目的片段,建立Fusarium荧光定量PCR(RT-PCR)检测体系的灵敏度比常规PCR高104倍,且特异性良好。利用该反应体系检测不同湿度环境下病残体和土壤病残体DNA含量的动态变化。结果表明:病残体及土壤病残体DNA初始拷贝数分别为6. 90×10~(11),1. 06×10~(12)拷贝数/g,经过温度27℃、80%湿度下处理30 d病残体DNA含量下降至5. 55×10~8和0拷贝数/g,而在温度27℃、20%湿度下含量分别为8. 04×10~9,1. 30×10~9拷贝数/g。因此,建立的Fusarium实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测病残体DNA的含量,为瓜类根腐病的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。
【关键词】镰孢菌  实时荧光定量PCR  湿度  病残体
【基金】国家重点研发计划项目(2017YFD0200603; 2016YFD0201000);; 农业部园艺作物遗传改良重点开放实验室
【所属期刊栏目】华北农学报
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