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红麻线粒体基因atp6过表达载体的构建与转化

2019-12-28分类号:S563.5

【作者】韦美玲  廖小芳  李枝玲  周步进  郑杰  孔祥军  刘一丁  李宏伟  周瑞阳  
【部门】广西大学农学院  广西农业科学院经济作物研究所  
【摘要】【目的】构建红麻线粒体基因atp6过表达载体遗传转化体系,为红麻线粒体基因的遗传转化及功能研究打下基础。【方法】以红麻UG93A花药cDNA为模板,通过同源克隆技术克隆atp6基因编码区(CDS)的全长序列;利用In-Fusion基因融合技术构建植物过表达载体,通过农杆菌介导法转化野生型烟草,并对转基因阳性烟草植株进行抗性筛选和PCR验证。【结果】红麻UG93A的atp6基因CDS全长为1182 bp,成功构建红麻atp6基因全长过表达载体pBI121-atp6-EGFP,并获得4株转基因烟草植株(B1、B2、B3和B4),使用过表达载体上3对不同位点的引物组合对转基因植株进行PCR验证,发现有2株转基因烟草植株在3对不同引物中稳定表达,即获得2株含pBI121-atp6-EGFP的T_0代转基因阳性植株(B1和B2)。【结论】构建的红麻线粒体基因atp6过表达载体遗传转化体系,可用于指导后续atp6基因调控红麻细胞质雄性不育(CMS)分子机理研究。
【关键词】红麻  细胞质雄性不育(CMS)  atp6基因  过表达载体  转化
【基金】国家自然科学基金项目(31571719);; 广西自然科学基金项目(2018JJB130045)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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