苹果U6启动子的克隆及功能分析
2019-12-01分类号：S661.1;Q943.2
【部门】中国农业科学院果树研究所/农业部园艺作物种质资源利用重点实验室/国家苹果育种中心
【摘要】【目的】U6启动子是CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统中驱动sgRNA转录的重要元件,其可能存在物种特异性因子,且长度不同转录活性存在差异。迄今在苹果(Malus×domestica)上对U6启动子尚缺乏研究。因此,筛选出转录活性高且片段大小合适的苹果U6启动子,可以优化苹果CRISPR/Cas9基因编辑体系。【方法】利用软件DNAMAN以及启动子元件在线分析网站PLACE和plant CARE对苹果U6启动子进行比对分析;克隆并构建U6启动子驱动萤火虫荧光素酶基因(Firefly luciferase,LUC)的融合表达载体,利用农杆菌介导的瞬时转化法分别转染苹果愈伤组织和本氏烟草(Nicotiana benthamiana)叶片;通过检测荧光素酶活性对各U6启动子进行转录活性比较。【结果】苹果基因组中共检索到6条U6 snRNA(E-value
【关键词】苹果 U6启动子 荧光素酶 本氏烟草 愈伤组织
【基金】国家现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-27);; 中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ASTIP-2016-RIP-02);; 辽宁省博士科研启动基金(20180540030);; 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610182019007)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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