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2A肽介导的割手密ScNAC1、ScDREB融合基因表达载体构建

2019-08-13分类号:S566.1;Q943.2

【作者】徐荣  吴清莲  孟玉  陈疏影  王先宏  何丽莲  李富生  
【部门】云南农业大学农学与生物技术学院  云南农业大学甘蔗研究所  
【摘要】【目的】本研究旨在构建适合甘蔗遗传转化的双基因表达载体,用于提高甘蔗栽培品种的抗旱能力,并探讨基因表达规律及互作效应。【方法】本研究以前期课题组在割手密中克隆到的具有抗旱功能ScNAC1和ScDREB为目的基因,以对单子叶植物高效、专一的Ubiquitin为启动子,以适于单子叶植物遗传转化的表达载体pCAMBIA1300-nu为基础载体,利用改造后的FMDV2A多肽进行连接,采用重叠延伸PCR(简称SOE PCR)将ScNAC1和ScDREB基因相融合,利用同源重组的方法连接表达载体。【结果】经PCR验证获得约2000 bp的目的条带,利用BamH I与Sac I双酶切,切出了载体的1条大片段和连接目的基因的3条小片段,测序结果验证扩增产物的正确性,融合基因在扩增过程中无突变发生。【结论】本研究成功构建了符合需要的融合基因表达载体,为后期甘蔗的遗传转化研究奠定了基础。
【关键词】ScNAC1  ScDREB  融合基因  2A肽  pCAMBIA1300nu
【基金】国家自然科学基金(31560417);; 国家重点研发计划项目(2018YFD1000503);; 云南省现代农业甘蔗产业技术体系建设专项(2009-2019)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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