半滑舌鳎创伤弧菌分离鉴定及其荧光定量PCR方法的建立
2019-04-16分类号:S943
【部门】天津农学院水产学院天津市水产生态及养殖重点实验室 河南师范大学水产学院
【摘要】为确定患病半滑舌鳎的病原,从其体内分离到3株革兰氏阴性菌,将其分别命名为ST-1、ST-3和ST-6,进行细菌理化特性、药敏试验、16S rDNA测序以及组织病理学观察等方面的研究,并建立了外膜蛋白(OMP)基因的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。结果显示,3株分离菌株的理化特性符合创伤弧菌特征,16S rDNA与创伤弧菌标准菌株ATCC29307序列相似性达99%以上,系统发育树分析显示,3株分离株与创伤弧菌自然聚为一支,最终鉴定为创伤弧菌;药敏试验显示,3株菌对头孢克肟、头孢哌酮、链霉素、亚胺培南和氟苯尼考等药物高度敏感。人工回归感染试验表明,分离株具有致病性,且半滑舌鳎、斑马鱼的临床症状与自然患病鱼症状相似;组织病理学观察显示,鳃丝上皮细胞增生,鳃小片肿胀黏连、颗粒细胞和黏液细胞增多,肝脏中央静脉淤血,肾脏出血、坏死,肠道黏膜固有层萎缩、黏液细胞增多等。进一步建立OMP基因的荧光定量PCR方法,结果显示,标准曲线的相关系数为0.995,检测下限为1.88×10~2 CFU/mL。以上结果可为半滑舌鳎弧菌病的致病机理、分子诊断和防治提供科学参考。
【关键词】半滑舌鳎 创伤弧菌 组织病理 荧光定量PCR
【基金】国家自然科学基金(31272692);; 天津市自然科学基金(18JCYBJC29900,16JCZDJC33500);; 天津市水产产业技术体系创新团队(ITTFRS2017009,ITTFRS2019049);; 天津市水产生态及养殖重点实验室开放基金(TJAE201803);; 天津农学院综投平台项目(J01009030638)~~
【所属期刊栏目】水产学报
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