hAPOB的克隆、原核表达及抗体效价分析
2019-02-28分类号:S852.4
【部门】江苏丘陵地区镇江农业科学研究所 南京师范大学生命科学学院 江苏大学土木工程与力学学院 江苏省句容市动物疫病预防控制中心 江苏省农业科学院畜牧研究所
【摘要】【目的】人载脂蛋白B(hAPOB)是保持人体血脂恒定的重要蛋白,检测hAPOB具有重要的临床价值。【方法】本研究将hAPOB(97-526AA)序列连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1-hAPOB(97-526AA)原核表达质粒,然后将其转入宿主菌BL21,宿主菌表达出与预期分子量大小相符的80 kDa的融合蛋白;将纯化后的融合蛋白免疫湖羊,制备抗hAPOB血清并检测抗体效价。【结果】每次注射0.4 mg的原核表达抗原,湖羊抗血清的产生效果最佳;经间接酶联免疫分析(ID-ELISA)方法检测,原核表达蛋白免疫湖羊得到的hAPOB抗体效价为l︰40000。【结论】本试验获的抗血清能够满足商用标准,为后续拓展其应用奠定了基础。
【关键词】hAPOB pGEX-4T-1 抗血清 抗体效价 湖羊
【基金】江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(16)1054];; 镇江市科技局社会发展项目(SH2018003);; 句容市科技局民生计划项目(SF2018022693)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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