标题
  • 标题
  • 作者
  • 关键词

鲫脑组织细胞系酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用

2019-01-15分类号:S943

【作者】许晨  周勇  史玉恒  范玉顶  刘文枝  江南  赵建青  曾令兵  
【部门】中国水产科学研究院长江水产研究所  
【摘要】为深入研究鲤疱疹病毒Ⅱ型CyHV-2与宿主细胞相互作用机制,以鲫脑组织细胞系(Gibel carp brain,GiCB)总RNA为模板,反转录合成cDNA,扩增获得双链cDNA,与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌Y187,构建了GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库。以CyHV-2 ORF25编码蛋白为诱饵,与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交,筛选与其互作的GiCB细胞受体。结果显示:GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库转化效率为1.03×10~6 CFU/μg,滴度为1.24×10~6 CFU/mL,PCR扩增结果表明文库中插入片段的大小在1.5 kb左右。将表达CyHV-2 ORF25编码蛋白的诱饵菌与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交后,筛选得到与ORF25编码蛋白相互作用蛋白的阳性克隆,为进一步研究CyHV-2的感染机制奠定了前期基础。
【关键词】酵母双杂交  鲫脑组织细胞cDNA文库  鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25编码蛋白  蛋白质的互作
【基金】中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2017HY-ZD0306,2016HY-ZD0501);; 国家“现代农业产业技术体系建设专项资金”(CARS-45-16);; 武汉市关键技术攻关计划:2016020101010083
【所属期刊栏目】淡水渔业
文献传递