梅花鹿Thymosin beta 10基因的原核表达、活性鉴定和多克隆抗体制备
2018-11-15分类号:S825
【部门】中国农业科学院特产研究所/特种经济动物分子生物学国家重点实验室/吉林省鹿茸工程研究中心 长春科技学院
【摘要】为研究梅花鹿Thymosin beta 10基因(Tβ10)在鹿茸快速生长过程中的作用,利用Gateway技术构建梅花鹿Tβ10基因的原核表达载体—pDEST17-Tβ10并诱导表达,对融合蛋白进行功能检测及多克隆抗体制备。结果表明:1)获得了190bp Tβ10基因开放阅读框序列,并获得重组表达载体pDEST17-Tβ10。2)pDEST17-Tβ10在宿主BL21-SI中诱导表达条件为0.3mol/L NaCL诱导2h,获得产物的最终浓度为0.50mg/mL。3)制备的Tβ10蛋白多克隆抗体血清效价在105之上,该抗体可以特异性结合天然和原核表达的Tβ10蛋白。4)离体检测发现,Tβ10融合蛋白一方面可以促进人脐静脉内皮细胞增殖,另一方面可以抑制鹿茸前成软骨区细胞的增殖。综上所述,本研究获得了具有生物活性的Tβ10融合蛋白,并制备了高度特异性的梅花鹿Tβ10蛋白多克隆抗体,为深入研究Tβ10基因的生物学功能奠定了基础。
【关键词】梅花鹿 Thymosin beta 10 原核表达 鹿茸 多克隆抗体
【基金】吉林省自然科学基金项目(20170101032JC,20170101003JC);; 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610342018028)
【所属期刊栏目】中国农业大学学报
文献传递