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一株白牦牛源牛病毒性腹泻病毒E0基因的原核表达与序列分析

2018-10-16分类号:S852.653

【作者】马鹏  李林杰  常秋燕  王悦萦  马晓霞  马忠仁  
【部门】西北民族大学甘肃省动物细胞工程技术研究中心  西北民族大学生命科学与工程学院  
【摘要】【目的】本研究旨在对来源于白牦牛的牛病毒性腹泻病毒(BVDV) GSTZ株的E0基因进行分析,并利用E0基因对GSTZ进行基因分型。【方法】通过提取牛病毒性腹泻病毒(BVDV) RNA,使用RT-PCR技术扩增BVDV E0基因,将其插入到pET-28a中,构建pET-28a-E0原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆,鉴定及测序。IPTG诱导后使用BVDV阳性血清作一抗,经western blot鉴定。根据E0基因的序列进行同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树。利用DNAstar预测E0蛋白的抗原表位。【结果】本研究表达的E0蛋白大小与预期结果相符且该蛋白具有良好的抗原性。通过对E0基因序列的同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树,说明牛病毒性腹泻病毒GSTZ株基因型可能属于牛病毒性腹泻病毒-1a亚型,也可能是其他基因亚型发生较大突变产生变异。通过预测E0蛋白B细胞的抗原表位主要位于:7-12、22-26、62-63、94-97、101-105、115-119、127-128、138-140、185-187、215-219位氨基酸残基; T细胞潜在优势抗原区域主要位于:10-14、19-31、36-43、52-58、77-86、96-98、137-140、148-150、167-191、209-211位氨基酸残基。【结论】E0蛋白具有良好的抗原性,通过对抗原表位预测以及对GSTZ进行基因分型,为后续基因工程疫苗和BVDV检测试剂盒的开发提供了理论依据。
【关键词】牛病毒性腹泻病毒  E0基因  原核表达  序列分析  抗原表位
【基金】动物医学生物工程创新团队发展计划(IRT_17R88);; 科技部援助项目资助(KY201501005);; 甘肃省科技计划资助(1504WKCA094);; 研究生科研创新项目(Yxm2018138)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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