鳜胚胎细胞系的建立与应用
2018-10-15分类号:S917.4
【部门】上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心 上海海洋大学水产动物遗传育种中心上海市协同创新中心 上海海洋大学水产科学国家级实验科教示范中心 安徽省农业科学院水产研究所
【摘要】为更好地开展鳜基因功能研究和药物筛选工作,提高基因转染效率,本研究以鳜囊胚期胚胎为材料,采用含有20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养,建立了生长稳定的鳜胚胎细胞系MFE。在此基础上,采用绿色荧光蛋白(GFP)作为标记物,在HEK293T细胞中体外包装逆转录病毒,再感染MFE细胞系。MTT法分析表明传代后细胞培养96 h内,细胞生长率变化也经历增殖、降低到达稳定期。而且MFE细胞能稳定表达GFP基因,感染效率为20%±5%,而脂质体转染效率为3%±2%。可见包装病毒感染细胞不仅能获得稳转细胞系,效率也远高于脂质体瞬时转染。荧光定量PCR分析表明,MFE细胞系能表达Irf1、Irf3和Irf7基因,Irf1基因表达量最高。MFE细胞系受到poly I:C刺激后,Irf1、Irf3和Irf7的表达量分别升高3.5,2.3和2.1倍。因此,MFE细胞通过病毒感染可以获得较高的转染效率,该细胞可作为鳜免疫相关基因功能研究的工具。
【关键词】鳜 细胞培养 逆转录病毒 干扰素调节因子
【基金】现代农业产业技术体系专项(CARS-46);; 安徽省农业科学院人才发展基金(16F0505);; 安徽省自然科学基金(1808085QC81)~~
【所属期刊栏目】水产学报
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