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青稞核糖体蛋白基因HbRPL19的克隆、序列分析及原核表达

2018-07-12分类号:S512.3

【作者】徐齐君  扎桑  王玉林  原红军  曾兴权  尼玛扎西  
【部门】西藏自治区农牧科学院农业研究所  省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室  西藏自治区农牧科学院  
【摘要】【目的】克隆青稞核糖体蛋白基因HbRPL19,分析其序列特征并在大肠杆菌中诱导目的蛋白,为后续的研究奠定基础。【方法】根据鉴定得到的青稞HbRPL19的序列设计了引物,从青稞叶片的c DNA中扩增得到目的片段,并对目的基因序列进行了测序鉴定和序列分析,同时构建了原核表达载体p ET28a-RPL19,转化入大肠杆菌BL21(DE3)后利用IPTG诱导外源蛋白质表达并检测。【结果】成功扩增出了青稞核糖体蛋白基因HbRPL19的CDS全长序列,大小为654 bp。根据生物信息学分析的结果,HbRPL19编码的蛋白质含有217个氨基酸,相对分子质量为24.47 KD,理论等电点(p I)为10.42,总平均亲水性(GRAVY)为-0.353,不稳定系数为53.46,存在典型的SH3-like结构域和核糖体蛋白L19结构域。系统进化分析表明,HbRPL19与小麦和山羊草的RPL19具有较近的亲缘关系。蛋白表达结果显示,重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。【结论】获得了青稞抗寒相关基因HbRPL19的序列和蛋白。
【关键词】青稞  核糖体蛋白  RPL19  序列分析  原核表达
【基金】西藏财政专项(2017CZZX001/2,2015CZZX001,2018CZZX 001);; 西藏科技重大专项(Z2016B01N01)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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