草鱼呼肠孤病毒873株逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法研究
2018-05-16分类号:S943
【部门】中国检验检疫科学研究院
【摘要】为提高草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)的检测效率,根据GCRV-873株VP5基因片段,设计了2对特异性引物,建立了检测GCRV-873株的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。结果显示:该方法使用25μL反应体系,经优化后的反应温度为65℃,反应时间1 h,检测限可达10个拷贝数的病毒核酸,比传统的RT-PCR方法要高10倍。且不与鲤春病毒、传染性造血器官坏死病病毒、传染性胰脏坏死病毒和病毒性出血性败血症病毒RNA产生交叉反应。在反应体系中加入染料后,反应结果肉眼直接可见,是一种特异性强、方便快捷的检测方法,适合GCRV-873株的现场初筛和核酸检测工作。
【关键词】草鱼呼肠孤病毒 逆转录环介导等温扩增检测方法 检测限 特异性
【基金】“十二五”国家科技支撑计划项目(2013BAD12B02)
【所属期刊栏目】淡水渔业
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