小立碗藓GFP-CAD1-PNT182融合基因表达载体的构建
2017-09-27分类号：Q943.2
【部门】贵州师范大学生命科学学院
【摘要】【目的】为利用绿色荧光蛋白基因(GFP)的表达情况优化聚乙二醇(PEG)介导的小立碗藓原生质体的转化体系及检测CAD1基因在细胞中的定位,构建小立碗藓GFP-CAD1-PTN182融合基因表达载体。【方法】用高保真酶获得GFP基因,通过双酶切GFP基因和CAD1-PTN182表达载体,将两片段洗脱回收,然后用T4-DNA连接酶将酶切产物在16℃条件下过夜连接。将连接产物转化到E.coli DH5α感受态细胞中,通过凝胶成像电泳的方法,挑选阳性克隆进行验证,并经过酶切验证和测序。【结果】序列对比相似度达10
【关键词】GFP 高保真酶 载体构建 基因克隆
【基金】国家自然科学基金“苔藓植物的类木质素合成及在防御反应中作用的研究”(31260426);国家自然科学基金“灰霉菌胁迫下小立碗藓的转录组分析及重要抗病基因鉴定”(31560508)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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