基于病毒mRNA监测的传染性脾肾坏死病毒灭活快速检验方法建立及其应用
2017-08-08分类号：S941.4
【部门】华中农业大学水产学院 广东省水生动物疫病预防控制中心 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心
【摘要】为建立传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)灭活快速检验方法,从ISKNV感染CPB细胞系转录谱筛选并经q RT-PCR验证表达量最高的病毒ORF099基因作为快速检测靶基因。以质粒p MDORF099为标准品,采用q PCR方法绘制了CT值与质粒拷贝数的标准曲线,其线性方程为CT=–3.42lgx+39.455,最低检测限为3拷贝/μL,结果显示组间和组内变异系数均小于2%,表明该方法具有较高的灵敏度和较好的重复性。将ISKNV病毒悬液10倍稀释成100103拷贝/m L,分别取1 m L病毒稀释液接种CPB
【关键词】传染性脾肾坏死病毒 灭活疫苗 灭活检验 mRNA 荧光定量RT-PCR
【基金】国家科技支撑计划(2012BAD25B02);; 广东省海洋渔业科技推广专项(A201501B12)
【所属期刊栏目】水产学报
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