穿膜肽标记的荧光素酶蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化及其活性研究
2018-03-01分类号：Q78;R446
【部门】广州中医药大学第二临床医学院 中国科学院广州生物医药与健康研究院 广州中医药大学广东省中医院检验医学部
【摘要】将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同的诱导时机、诱导温度、IPTG的浓度和Mg(2+)浓度条件下培养大肠杆菌,通过SDS-PAGE和发光强度检测分析TAT-LUC的酶活性强度及表达量;将高活性的TAT-LUC与LUC对比检测ATP,通过发光强度分析TAT-LUC的敏感性和可靠性。表明:在含Mg(2+)浓度为50mmol/L的LB培养基中将大肠杆菌培养至OD600为0.6时,加入终浓度为0.5mmol/L的IPTG,22℃诱导16h可获得大量高活性的TAT-LUC;相比LUC,TAT-LUC
【关键词】荧光素酶 穿膜肽 ATP 表达条件 酶活性
【基金】国家自然科学基金项目(81602608)
【所属期刊栏目】实验技术与管理
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