山羊睾丸支持细胞的培养与双荧光自噬报告载体的建立
2018-01-30分类号：S827
【部门】南京农业大学动物科技学院/江苏省家畜胚胎工程实验室 南京农业大学动物医学院
【摘要】[目的]本试验旨在建立一个实时追踪山羊细胞自噬发生状况的工具,以探讨细胞自噬对睾丸支持细胞(SC)和生殖细胞的影响。[方法]通过PCR法扩增mCherry-EGFP-LC3基因序列1 884 bp,将其导入真核表达载体pEX-3中,得到重组质粒pmCherry-EGFP-LC3;将pmCherry-EGFP-LC3及对照质粒p EX-3分别转染体外分离培养的山羊SC,饥饿处理12 h后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的表达,用RT-qPCR和Western blot检测细胞中自噬相关基因和蛋白表达变化,用
【关键词】自噬 睾丸支持细胞 微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3) 山羊
【基金】江苏省自然科学基金项目(BK20161444)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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