慢病毒介导稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系的构建
2018-02-28分类号：S826
【部门】河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室
【摘要】构建1株能够稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系,用于小尾寒羊未来的品种保护、开发与利用,首先利用组织块培养法制备了小尾寒羊原代成纤维细胞,然后利用全基因合成法克隆了绵羊FABP4基因,并构建了过表达FABP4的慢病毒载体。经过包装后,使用获得的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞,最后应用Western Blot鉴定FABP4蛋白的过表达水平。结果表明,经过传代23次后,得到纯度较高的小尾寒羊原代成纤维细胞。滴度测定表明,当在96孔板中添加病毒原液量为10(-4)μL时,
【关键词】FABP4基因 慢病毒 小尾寒羊 原代成纤维细胞
【基金】转基因生物新品种培育子课题(2014ZX08008003-007);; 河南省科技攻关计划项目(162102110035);; 河南省农业科学院优秀青年科技基金项目(2016YQ18)
【所属期刊栏目】华北农学报
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