简易型同源重组载体pAmpR-NeoR的构建和效果检测
2017-12-28分类号：Q78
【部门】河北科技大学生物科学与工程学院
【摘要】为了构建能够灵活用于CRISPR/Cas9系统进行基因编辑的供体质粒,利用pcDNA3.1(+)-HA-His为模板,分别扩增了其AmpR-ori片段和NeoR片段,然后连接,构建了一个简易型同源重组载体pAmpR-NeoR。载体的正选择标记NeoR基因两侧分别引入了BamHⅠ和XhoⅠ作为克隆位点,用于左、右同源臂的克隆。利用这一载体,构建了针对小鼠FasL基因的供体质粒。结果显示靶序列发生基因编辑。pAmpR-NeoR以同尾酶作为多克隆位点,这使其具有良好的扩展性、灵活性和序列通用性,便于根据需要进一
【关键词】基因编辑 同源重组载体 同尾酶
【基金】国家自然科学基金面上项目(81171455);国家自然科学基金青年项目(31100715;81402305);; 河北省自然科学基金青年项目(C2013208005);; 河北省高等学校科学技术研究项目(QN2014043);; 河北科技大学五大平台开放基金课题;; 中国科学院纳米生物效应与安全性重点实验室开放课题资助项目(NSKF201605)
【所属期刊栏目】华北农学报
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